時(shí)間分辨熒光免疫分析法（Time resolved fluoroisnmunoassay,TRFIA）是上世紀(jì)70年代由芬蘭的Soini和Hemmia提出的一種新型的檢測(cè)手段，TRFIA 用稀土離子作為示蹤物標(biāo)記蛋白質(zhì)、多肽、激素、抗體、核酸探針或生物活性細(xì)胞,與其螯合劑、增強(qiáng)液(有一部分不需要) 在待反應(yīng)體系(如:抗原抗體免疫反應(yīng)、生物素親和素反應(yīng)、核酸探針雜交反應(yīng)、靶細(xì)胞與效應(yīng)細(xì)胞的殺傷反應(yīng)等) 發(fā)生特異性親和反應(yīng)后,用時(shí)間分辨熒光分析儀測(cè)定最后產(chǎn)物中的熒光強(qiáng)度,根據(jù)熒光強(qiáng)度和相對(duì)熒光強(qiáng)度比值,推測(cè)反應(yīng)體系中分析物的濃度,達(dá)到定量分析的目的。TRFIA與化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)技術(shù)并稱(chēng)為三大超靈敏檢測(cè)技術(shù)，在食品檢測(cè)、醫(yī)學(xué)臨床檢測(cè)、環(huán)境檢測(cè)以及生物學(xué)科研檢測(cè)等方面廣泛應(yīng)用。

目前，根據(jù)熒光增強(qiáng)技術(shù)的不同，TRFIA可分為三種類(lèi)型：(1)DELFIA (Dissociation enhanced lanthanide fluoroimmunoassay)系統(tǒng)，為芬蘭wallac公司（2000年并入美國(guó)PerkinElmer公司）于上世紀(jì)80年代推出，因其具有非常高靈敏度，目前在國(guó)內(nèi)臨床疾病檢測(cè)領(lǐng)域已有廣泛應(yīng)用；(2)DSLFIA（Direct solid Pahse lanthanide fluoroimmunoassay）系統(tǒng)，為加拿大Cyber Fluor公司推出，但因靈敏度不夠理想，目前在國(guó)內(nèi)沒(méi)有推廣；(3)基于熒光微球的TRFIA (Micro-TRFIA)，Micro-TRFIA是一種全新的時(shí)間分辨熒光檢測(cè)手段，它結(jié)合了鑭族元素?zé)晒獾拈L(zhǎng)壽命和納米微球的信號(hào)放大效應(yīng)，將鑭族元素Eu3+及其配合物包裹于納米微球中，經(jīng)過(guò)表面活化后，將抗體標(biāo)記于標(biāo)記物表面，形成復(fù)合物，將該復(fù)合物用于免疫檢測(cè)，可極大地提高靈敏度，并獲得較為寬闊的線(xiàn)性范圍，其實(shí)際性能不低于甚至高于DELIFA技術(shù)。

    TRFIA的三種類(lèi)型中前兩者因其需要解離后再增強(qiáng)或者需要導(dǎo)入生物素-親和素信號(hào)放大系統(tǒng)，無(wú)法與免疫層析技術(shù)相結(jié)合，僅能與酶標(biāo)板配合使用，需要多次洗板操作，過(guò)程繁復(fù)，檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，且需要較為昂貴的熒光讀數(shù)儀讀數(shù)，因此目前一般僅限于實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)，無(wú)法實(shí)現(xiàn)POCT（Point-Of-Care Testing）應(yīng)用，而Micro-TRFIA技術(shù)采用高分子聚合物將幾千乃至上萬(wàn)個(gè)熒光分子包裹或連接在聚合物納米粒子中，不但能將熒光信號(hào)成千上萬(wàn)倍的放大，滿(mǎn)足超低含量生物組分的測(cè)定，而且高分子納米粒子形成的網(wǎng)狀外殼對(duì)有機(jī)染料能起到很好保護(hù)作用，可有效減弱測(cè)定環(huán)境中的活性氧、自由基或其他試劑的光漂白作用，顯著提高熒光分子的光穩(wěn)定性。更為重要的是，Micro-TRFIA技術(shù)可以與免疫層析技術(shù)（Lateral Flow Immunochromatography Assay）完美結(jié)合，開(kāi)發(fā)出熒光定量免疫層析技術(shù)平臺(tái)，實(shí)現(xiàn)現(xiàn)場(chǎng)快速定量檢測(cè)，檢測(cè)靈敏度比膠體金免疫層析技術(shù)高2-3個(gè)數(shù)量級(jí)，因此成為目前國(guó)內(nèi)外研究的新熱點(diǎn)。

      微測(cè)生物一直致力于基于Micro-TRFIA技術(shù)的時(shí)間分辨熒光方法學(xué)的研發(fā)，開(kāi)發(fā)出的Microdetection ^TM系列 時(shí)間分辨熒光微球(Time Resolved Fluorescent Microsphere)，每個(gè)微球中最多可包裹約18萬(wàn)個(gè)熒光分子，大大提高了熒光微球的熒光強(qiáng)度，有效提高了分析靈敏度；同時(shí)熒光微球表面修飾有合適密度的羧基或其它功能基團(tuán)，用于與蛋白或抗體的共價(jià)偶聯(lián)，提高了標(biāo)記物的穩(wěn)定性。更為重要的是由于微球包埋的稀土離子已經(jīng)過(guò)了螯合，無(wú)需解離增強(qiáng)步驟，因此從根本上解決了傳統(tǒng)的DELFIA法只能在液相中而不能在固相界面反應(yīng)的問(wèn)題，從而解決了將時(shí)間分辨熒光應(yīng)用于免疫層析平臺(tái)的技術(shù)瓶頸（詳情請(qǐng)見(jiàn)微測(cè)生物時(shí)間分辨熒光免疫層析定量檢測(cè)平臺(tái)），在此基礎(chǔ)上可開(kāi)發(fā)出靈敏度高于普通膠體金或有色乳膠免疫層析方法1-3個(gè)數(shù)量級(jí)的定量檢測(cè)技術(shù)。同樣時(shí)間分辨熒光微球也可以用于微孔板超敏定量檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)（詳情請(qǐng)見(jiàn)微測(cè)生物時(shí)間分辨熒光微孔板超敏定量檢測(cè)技術(shù)平臺(tái)），只需洗滌幾次后即可進(jìn)行熒光測(cè)定，操作步驟比DELFIA簡(jiǎn)單很多，更容易實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化操作。