2014年12月15日，衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心發(fā)布2015年全國(guó)外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測(cè)序檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)通知，表示將于2015年度正式開展全國(guó)外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測(cè)序檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。

室間質(zhì)量評(píng)價(jià)也稱為能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)（以下簡(jiǎn)稱PT），是指多家實(shí)驗(yàn)室分析同一標(biāo)本并由外部獨(dú)立機(jī)構(gòu)收集、反饋實(shí)驗(yàn)室上報(bào)結(jié)果并評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)室操作的活動(dòng)，通過實(shí)驗(yàn)室間的比對(duì)判定實(shí)驗(yàn)室的校準(zhǔn)、檢測(cè)能力以及監(jiān)控其持續(xù)能力。長(zhǎng)期以來(lái)，PT一直是臨床實(shí)驗(yàn)室和公共衛(wèi)生實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量保證的一個(gè)重要組成部分。

室間質(zhì)評(píng)目的：提高實(shí)驗(yàn)室外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測(cè)序檢測(cè)的質(zhì)量

衛(wèi)生部對(duì)全國(guó)外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測(cè)序檢測(cè)展開室間質(zhì)量評(píng)價(jià)，主要目的是提高實(shí)驗(yàn)室外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測(cè)序檢測(cè)的質(zhì)量。通知原文如下：

“新一代高通量測(cè)序技術(shù)發(fā)展迅速，并已由實(shí)驗(yàn)室研究進(jìn)入到臨床檢測(cè)應(yīng)用，如外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）檢測(cè)、胚胎植入前遺傳學(xué)診斷（PGD和胚胎植入前遺傳學(xué)篩查（PGS）等，其中外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）檢測(cè)目前已有國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局（CFDA）批準(zhǔn)的儀器和試劑。為提高實(shí)驗(yàn)室外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測(cè)序檢測(cè)的質(zhì)量，衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心于2015年度正式開展全國(guó)外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測(cè)序檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。”

2014室間質(zhì)評(píng)結(jié)果：絕大多數(shù)結(jié)果符合預(yù)期

這并不是衛(wèi)生部第一次發(fā)布全國(guó)外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測(cè)序檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)通知，2014年11月，為配合衛(wèi)計(jì)委新一代高通量測(cè)序技術(shù)應(yīng)用試點(diǎn)工作，衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心開展了該項(xiàng)目的全國(guó)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)活動(dòng)，并要求各臨床實(shí)驗(yàn)室使用日常所用試劑和程序進(jìn)行檢測(cè)。以下是2014室間質(zhì)評(píng)主要結(jié)果，數(shù)據(jù)來(lái)源于《全國(guó)外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18 和 T13）高通量測(cè)序檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)調(diào)查活動(dòng)結(jié)果報(bào)告 》。

1、樣本情況

本次共發(fā)放 20 個(gè)質(zhì)評(píng)樣本，編號(hào)分別為 1401、1402、1403、1404、1405、1406、1407、1408、1409、1410、1411、1412、1413、1414、1415、1416、1417、1418、1419、1420。樣本為人血漿，樣本量為 700μl。其中 15 份樣本用于本次PT 成績(jī)?cè)u(píng)價(jià)，5 份樣本用于正式質(zhì)評(píng)發(fā)放樣本類型的參考，不納入本次 PT 成績(jī)?cè)u(píng)價(jià)。具體信息見下表。 

2、各檢測(cè)平臺(tái)使用的實(shí)驗(yàn)室數(shù)及相關(guān)參數(shù) 

本次質(zhì)評(píng)涉及多個(gè)檢測(cè)平臺(tái)（由于 CFDA 為檢測(cè)儀器和配套試劑共同審批，因此本小結(jié)中所提及的檢測(cè)平臺(tái)，除 LDT 外，均同時(shí)代表該平臺(tái)及相應(yīng)的配套試劑）。其中有醫(yī)療器械注冊(cè)證的檢測(cè)平臺(tái)：BGISEQ-100（武漢華大基因生物醫(yī)學(xué)工程有限公司），BGISEQ-1000（武漢華大基因生物醫(yī)學(xué)工程有限公司），DA8600（中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司）等。其他檢測(cè)平臺(tái)有：NextSeq CN500，BioelectronSeq 4000，NextSeq 500，Ion Proton，Hiseq2000， Hiseq 2500，Ion torrent PGM。需要說(shuō)明的是，沒有醫(yī)療器械注冊(cè)證的試劑和儀器，均屬實(shí)驗(yàn)室自用方法（laboratory developed test，LDT），具體不同平臺(tái)的參數(shù)見下表。

3、實(shí)驗(yàn)室回報(bào)結(jié)果情況 

共計(jì)有 81 家實(shí)驗(yàn)室回報(bào)質(zhì)評(píng)結(jié)果，4 家實(shí)驗(yàn)室報(bào)告了兩個(gè)平臺(tái)的檢測(cè)結(jié)果，共計(jì)收到結(jié)果 85 份，其中有效結(jié)果 84 份（即回報(bào)結(jié)果完整、在截止日期內(nèi)回報(bào)的結(jié)果）。醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室共計(jì)回報(bào) 73 份結(jié)果，獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室回報(bào) 12 份結(jié)果?？傮w來(lái)說(shuō)，本次質(zhì)評(píng)絕大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果均符合預(yù)期結(jié)果。在 15 份 PT 評(píng)價(jià)樣本中，98.8% (83/84)的實(shí)驗(yàn)室與預(yù)期結(jié)果完全相符，只有 1 家實(shí)驗(yàn)室兩份陽(yáng)性樣本報(bào)告了“臨界/灰區(qū)”的結(jié)果，其余結(jié)果也均與預(yù)期結(jié)果相符，具體的總體結(jié)果回報(bào)情況見下表。 

4、各檢測(cè)平臺(tái)不同樣本的符合率情況 

一家使用 Hiseq 2500 的實(shí)驗(yàn)室報(bào)告了 1405 和 1413 號(hào)樣本（預(yù)期結(jié)果為 T13 陽(yáng)性）“臨界/灰區(qū)”的結(jié)果。其他平臺(tái)所有實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)結(jié)果均與預(yù)期結(jié)果相符，無(wú)假陰性和假陽(yáng)性結(jié)果。 

5、各檢測(cè)平臺(tái)對(duì)所有樣本檢測(cè)的測(cè)序原始數(shù)據(jù)量和唯一比對(duì) reads 數(shù)情況

6、PT 成績(jī)情況 

PT 成績(jī)≥80（即 80 和 100 分）的實(shí)驗(yàn)室發(fā)放質(zhì)評(píng)合格證書；PT 成績(jī)<80 分的實(shí)驗(yàn)室和未回報(bào)完整定性結(jié)果的實(shí)驗(yàn)室發(fā)放質(zhì)評(píng)參加證書。本次質(zhì)評(píng)中，PT成績(jī)?yōu)?100 分的實(shí)驗(yàn)室 83 家，PT 成績(jī)?cè)?80~100 分（含 80 分）的實(shí)驗(yàn)室 1 家。1 家實(shí)驗(yàn)室獲得質(zhì)評(píng)參加證書。

對(duì)開展高通量測(cè)序 NIPT 臨床檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室的啟示

在2014室間質(zhì)評(píng)的報(bào)告最后，衛(wèi)計(jì)委指出：雖然各臨床實(shí)驗(yàn)室的檢測(cè)結(jié)果良好，但基于本檢測(cè)項(xiàng)目在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室均尚未對(duì)臨床開展，因此，在將來(lái)正式開展高通量測(cè)序 NIPT 臨床檢測(cè)中，仍需謹(jǐn)慎對(duì)待。 

盡管目前商業(yè)化的平臺(tái)（包括 CFDA 批準(zhǔn)或正在進(jìn)行注冊(cè)的平臺(tái)）在生物信息學(xué)分析和結(jié)果判讀方面，進(jìn)行了簡(jiǎn)化，但是與以往臨床實(shí)驗(yàn)室開展的核酸檢測(cè)項(xiàng)目相比，基于高通量測(cè)序的 NIPT 仍然是一個(gè)相對(duì)復(fù)雜的檢測(cè)過程。通常，NIPT 的檢測(cè)流程包括：DNA 提取，文庫(kù)構(gòu)建，文庫(kù)純化，文庫(kù)定量，文庫(kù)混合、測(cè)序以及結(jié)果分析的過程，完成一個(gè)批次的檢測(cè)至少需要 3~4 天，此外，在文庫(kù)構(gòu)建和文庫(kù)定量中，會(huì)涉及到 PCR 擴(kuò)增過程。 

因此，如實(shí)驗(yàn)室開展高通量測(cè)序 NIPT 的日常檢測(cè)，需為臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室，具有一定的核酸檢測(cè)的基礎(chǔ)，選擇合適的檢測(cè)平臺(tái)，并進(jìn)行性能驗(yàn)證，具備經(jīng)過嚴(yán)格培訓(xùn)的高素質(zhì)實(shí)驗(yàn)人員，建立實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，在每批次的檢測(cè)中需使用陰性質(zhì)控和弱陽(yáng)性質(zhì)控，參加室間質(zhì)量評(píng)價(jià)。

具體來(lái)說(shuō)，在本次質(zhì)評(píng)中，部分實(shí)驗(yàn)室僅有兩個(gè)不同的區(qū)域，不符合臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的設(shè)置要求；在選擇檢測(cè)平臺(tái)時(shí)，醫(yī)院臨床實(shí)驗(yàn)室不建議采用實(shí)驗(yàn)室自用方法 (LDT)，因?yàn)長(zhǎng)DT 首先需要建立自配試劑的標(biāo)準(zhǔn)操作程序，然后還需對(duì)檢測(cè)系統(tǒng)（包括檢測(cè)儀器、試劑以及生物信息學(xué)算法）進(jìn)行性能評(píng)價(jià)，給出重復(fù)性、分析敏感性、分析特異性、臨床敏感性、臨床特異性、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值以及陰性預(yù)測(cè)值等等性能指標(biāo)，而目前來(lái)說(shuō)，對(duì)于單個(gè)臨床實(shí)驗(yàn)室，要完成 NIPT 的性能評(píng)價(jià)是非常困難的；實(shí)驗(yàn)室需建立標(biāo)準(zhǔn)操作程序，并需考慮到開展大量樣本檢測(cè)后，出現(xiàn)文庫(kù)構(gòu)建失敗、檢測(cè)過程操作錯(cuò)誤、QC 未通過以及“灰區(qū)”樣本需復(fù)檢等情況，以及針對(duì)此情況，評(píng)價(jià)可能對(duì)檢測(cè)流程和報(bào)告時(shí)間產(chǎn)生的影響；在當(dāng)前的實(shí)驗(yàn)室環(huán)境條件下，儀器設(shè)備經(jīng)過一定時(shí)間的運(yùn)行后，是否仍能夠保持良好的性能，能否保持原有的 QC未通過率以及檢測(cè)失敗率；此外，也不排除技術(shù)快速的發(fā)展，新的檢測(cè)平臺(tái)的出現(xiàn)，或者在原有檢測(cè)平臺(tái)上的進(jìn)一步更新，導(dǎo)至現(xiàn)有的檢測(cè)平臺(tái)可能面臨更新或淘汰。 

臨床實(shí)驗(yàn)室需明確，基于高通量測(cè)序的 NIPT，只是一種篩查試驗(yàn)，而不是診斷試驗(yàn)，遺傳咨詢和進(jìn)一步的檢測(cè)非常重要。并且由于檢測(cè)原理是基于外周血游離 DNA，因此具有一定的檢測(cè)局限性，例如母體嵌合、胎盤嵌合、雙胎、外周血胎兒游離 DNA 比例低等均會(huì)對(duì)結(jié)果產(chǎn)生影響。

總結(jié)：無(wú)創(chuàng)產(chǎn)前檢測(cè)離規(guī)范使用又近了一步

不管怎樣，衛(wèi)計(jì)委發(fā)布室間質(zhì)評(píng)，就已預(yù)示著這項(xiàng)技術(shù)成熟、臨床應(yīng)用急需的檢測(cè)離規(guī)范使用又近了一步，而2014年率先通過室間質(zhì)評(píng)的技術(shù)平臺(tái)，例如上文提到的華大基因、達(dá)安基因、貝瑞和康、博奧生物等公司，無(wú)疑將在后續(xù)競(jìng)爭(zhēng)中獲得合作終端和客戶更多的信任。

附：衛(wèi)生部臨床檢驗(yàn)中心2015年全國(guó)外周血胎兒染色體非整倍體（T21、T18和T13）高通量測(cè)序檢測(cè)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)通知